培养基灭菌方法

物理与化学灭菌：多种策略保障无菌环境

一、物理灭菌法

在实验室中，我们依赖物理手段进行灭菌操作，主要包括高压蒸汽灭菌法、干热灭菌法以及滤过灭菌法。这些方法通过不同的原理来彻底杀灭微生物，确保实验环境的无菌状态。

1. 高压蒸汽灭菌法：这是实验室最常用的方法，适用于大多数耐高温培养基。通过将培养基装入高压蒸汽灭菌器，在压力1.0-1.2 kg/cm（对应温度121-125℃）下维持20-30分钟，彻底杀死细菌、真菌及病毒。这种方法操作简便，灭菌效果可靠。

2. 干热灭菌法：此方法适用于耐高温且需保持干燥的培养基或玻璃器皿。通过将培养基置于干热灭菌器或烘箱中，以160-170℃持续1-2小时，通过高温脱水灭活微生物。干热灭菌法操作简单，能够满足一些特定物品和材料的灭菌需求。

3. 滤过灭菌法：这是一种适用于含热敏成分的液体培养基的灭菌方法。通过0.22或0.45微米孔径的滤膜，如聚酯膜、聚酰胺膜等，真空抽滤去除微生物。滤液可直接用于无菌操作，确保实验结果的准确性。

二、化学灭菌法

化学灭菌法是一种辅助的灭菌手段，主要用于对热敏感的培养基处理。通过向培养基中加入化学消毒剂（如70%乙醇、过氧化氢、乙醛溶液），密封静置3-24小时，利用化学药剂破坏微生物结构。这种方法适用于小规模的培养基处理，但需注意药剂残留对实验结果的影响。

三、其他方法

除了上述两种主要方法外，还有一些其他常用的灭菌方法，如紫外线灭菌、间歇灭菌法等。这些方法在某些特定场景下具有一定的应用价值。例如，紫外线灭菌法通过短波辐射灭活表面微生物，但无法穿透培养基内部，且对细菌孢子无效。间歇灭菌法适用于无法耐受高压灭菌的培养基，通过常压下以100℃蒸汽分次处理（每日1次，连续3天），利用反复加热灭活耐热微生物。

四、灭菌方法选择原则

在选择适当的灭菌方法时，需要考虑多个因素。要根据培养基的耐热性选择合适的灭菌方法。对于含热敏成分的培养基，应优先选择化学法或滤过法。要根据实验室的设备条件进行选择。实验室应常规配置高压灭菌锅，对于特殊场景，可选用干热或滤过装置。要考虑灭菌的彻底性。高压蒸汽法灭菌效果最可靠，其他方法需结合实验需求验证有效性。在选择和使用灭菌方法时，应始终确保实验结果的准确性和可靠性。